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需要但未提供的試劑和器皿如下：

(1)?二氯甲烷，分析純

(2)?正己烷，分析純

(3)?甲醇，分析純

(4)?去離子水 ?????????

(5)?5mL圓底或錐底玻璃離心管

(6)?2ml玻璃進(jìn)樣瓶或者5ml圓底玻璃試管（一次性）

(7)?5mL有機(jī)玻璃離心管架（24孔），1個(gè)

(8)?17*17*10cm瓷盤(pán)，1個(gè)

?

試劑配制

預(yù)處理試劑：取1管試劑A，加入到1瓶試劑B中，劇烈震蕩使其完全溶解，備用【配制好的預(yù)處理試劑呈白色半透明狀，于2-8℃保存有效期10天】

?

1.1預(yù)處理

1）稱(chēng)取0.4±0.005g油樣于5mL玻璃離心管中，加入0.4mL?預(yù)處理試劑混勻；

2）室溫靜置5min（離心管斜躺在桌面上）

3）加入0.4mL去離子水、1mL正己烷劇烈振蕩2min；靜置分層約1min（此時(shí)可以先活化柱子）

1.2過(guò)SPE柱

1）活化：依次采用1mL二氯甲烷、1mL正己烷過(guò)柱

2）上樣：取1mL上層待凈化液加入柱中（見(jiàn)1.1預(yù)處理-3））；

3）淋洗：依次用1mL正己烷、1mL試劑C淋洗，最后吹空氣3s；

4）解吸：加入1mL二氯甲烷解吸（流速1mL/min），收集全部解吸液于2mL玻璃進(jìn)樣瓶中

5）濃縮及復(fù)溶：40℃水浴氮吹干；加入1mL甲醇渦旋15s；取0.1mL甲醇復(fù)溶液，再加入

0.1mL樣本稀釋液渦旋15s

實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)將檢測(cè)試劑盒從2-8℃冰箱中取出，于室內(nèi)溫度20-28℃下平衡1小時(shí)！

1）取出平衡后的適量板條，其余放回鋁膜袋中；

2）依次：加50μL標(biāo)準(zhǔn)品/樣本于相應(yīng)微孔中；加50μL酶結(jié)合物和50μL抗體至所有微孔；

3）蓋上板貼，于20-28℃下，孵育20分鐘；倒出微孔中液體；

4）將洗滌液注滿(mǎn)微孔浸泡15s倒出，重復(fù)2次；

5）加100μL底物至微孔中，于20-28℃下，孵育10分鐘；

6）加100μL終止液至微孔中，于450/630nm波長(zhǎng)下，讀數(shù)

1）結(jié)合率計(jì)算公式

其中，

?????????????????????????????B：為i樣本或濃度點(diǎn)的結(jié)合率；

?????????????????????????????A_i：為i樣本或濃度點(diǎn)的吸光度；

?????????????????????????????A₀：為零標(biāo)準(zhǔn)孔的吸光度；

2）建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：以標(biāo)準(zhǔn)品濃度的對(duì)數(shù)為x軸，以其對(duì)應(yīng)的結(jié)合率B的logit值為y軸，進(jìn)行線性擬合

建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣本結(jié)合率（計(jì)算見(jiàn)1）中公式）代入曲線方程，即可求出樣本中苯并（α）芘的含量。

3）超出檢測(cè)上限的樣本稀釋方法

①?將樣本前處理步驟“1.2過(guò)SPE柱-5）”中0.1mL甲醇復(fù)溶液用無(wú)水甲醇稀釋5倍；

②?將①的溶液，參照說(shuō)明書(shū)采用樣稀稀釋后點(diǎn)樣；

③?將得出的含量再乘以5，即為最終樣本中苯并（α）芘的含量；

1）注意事項(xiàng)

n?不同產(chǎn)品、不同批次之間試劑不得混用；

n?吸取不同試劑，要更換吸頭，以免造成試劑污染；

n?底物變?yōu)樗{(lán)色，表示已污染變質(zhì)或過(guò)期，不得使用；

n?終止液中含鹽酸，使用時(shí)防止接觸皮膚，如不小心濺到，及時(shí)用大量流水沖洗，嚴(yán)

重時(shí)請(qǐng)及時(shí)就醫(yī)；

n?苯并（α）芘為致癌物，使用標(biāo)準(zhǔn)品、陽(yáng)性樣本，須在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行操作，并

穿長(zhǎng)袖實(shí)驗(yàn)服，戴手套和口罩；