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應用于食品，保健食品原料，藥品原料，應用各種制劑劑型

靈芝提取物工藝研究：

[藥材來源]

本品為多孔菌科真菌赤芝ganodermalucidum（leyss.exfr.）karat，或紫芝g.sinensezhaoxuetzhang的干燥子實體。全年采收，除去雜質，剪除附有朽木、泥沙或培養基質的下端菌柄，陰干或40℃-50℃烘干。靈芝分布于華東、西南及河北、山西、臺灣、河南、廣東、海南、廣西、貴州。紫芝分布于河北、山東、浙江、江西、福建、臺灣、湖南、廣東、貴州，現多為栽培。

[藥材質量]

1.靈芝中不同部位靈芝酸b的含量比較（1）

赤芝菌蓋：菌蓋表皮層0.56mg/g，木栓層0.19mg/g，菌柄0.29mg/g，菌蓋子實體全部0.53mg/g，孢子粉0.087mg/g，赤芝發酵菌絲體未檢出，紫芝菌蓋極微量。

[產品規格]

1、靈芝提取物靈芝多糖的含量要求為5%、10%、15%、40%。（uv檢測）

2、靈芝提取物靈芝酸的含量要求為4%、8%。（hplc檢測）

[主要成分]

靈芝中的化學組成比較復雜，已報道的化學成分有150余種，其中子實體主要含有三萜類、甾類、氨基酸、多肽糖、香豆精苷、揮發油、油脂、生物堿及礦物元素。干的靈芝子實體含12%-13%水分，54%-56%纖維素，13-14%木脂素、1.9%-2%、1.6%-2.1%總氮，4%-5%還原物質，0.14%-0.16%甾類，0.08%-0.12%總酚和0.022%灰分。

1.三萜類

靈芝酸a、b、c、d、f（ganodericacida、b、c、d、f），從赤芝孢子粉酸性脂溶部分分離到8個三萜化合物，5個四環三萜酸，1個四環三萜醇，2個五環三萜內酯，分別為靈芝酸a（gonosporericacida），靈芝酸b、c、d、m，靈芝酮三醇（ganodermonotrid），靈芝孢子內酯a、b（ganosporelactonea、b）。

2.多糖、氨基酸肽及其他

靈芝多糖主要存在于靈芝細胞內壁，大部分為β-葡聚糖，少數α-葡聚糖，相對分子質量從數百到數十萬，除少量的小分子多糖外，大多不溶于高濃度乙醇，溶于熱水。靈芝多糖的組成除含有葡萄糖外，大多還含有少量阿拉伯糖、木糖、巖藻糖、鼠李糖、半乳糖和甘露糖等，部分多糖含有肽鏈，含肽鏈的多糖活性比較高。

3.核苷、甾醇、生物堿與呋喃

核苷類是一類具有廣泛的生理活性的水溶性成分，分別是尿嘧啶、尿嘧啶核苷、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、靈芝嘌呤。

靈芝中甾醇有近20種，含量較高，其骨架分為麥角甾醇類和甾醇兩種類型，即麥角甾醇等。

靈芝中生物堿的含量較低，膽堿、甜菜堿極其鹽酸鹽、靈芝堿甲、（gahoine）、靈芝堿乙（ganodine）。

[提取工藝]

1.靈芝多糖的提取

取靈芝5kg，洗去泥土，切成碎塊，回流提3次，合并3次提取液過濾，濾液減壓濃縮

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后加入乙醇，使含醇量達到80%，放置12h，離心，收集沉淀，加蒸餾水溶解煮沸，趁熱濾除不溶物，濾液在攪拌下再加入乙醇，使含醇量達到80%，放置析出灰紫色沉淀，低溫干燥，即得靈芝多糖粗品，收率約0.55%左右。將粗品溶于蒸餾水中，在攪拌下加入鞣酸溶液，煮沸15min，加入活性炭，趁熱濾過，濾液放冷。加入乙醇使含醇量達到70%，靜止24h，濾取析出物，用70%乙醇反復洗滌沉淀，再用蒸餾水連續洗脫溶解，洗出液濃縮，加入乙醇使含醇量達到70%，放置濾取沉淀于低溫干燥，即得靈芝多糖。靈芝水提取收率3.5%、4.3%、5.6%。

2.靈芝孢子油的提取

靈芝破壁孢子粉，用無水乙醇700c回流提取3次，40-500c減壓回收，得油狀物。用干燥劑除去水分。除去水分和單糖。

3.靈芝孢子酶破壁法（2）

孢子粉100g，用95%乙醇浸泡3d，濾去乙醇，加10%乙醇10倍量，及纖維素酶水解24h，再加中性蛋白酶于550c水解24h，再加酸性蛋白酶調ph=4.0，水解24h，滅酶濾過，用適量水洗，干燥，研粉得98g，收率為：97.5%。

孢子多糖的提取率，未破壁：1.13%；機械破壁：1.16%；酶法破壁：2.14%。

4.醇提水沉法

該法為先用乙醇提取，在提取液中加入水出現沉淀，取濾液濃縮后即為靈芝浸膏。

4.1原料處理：取干燥合格的靈芝子實體切碎粉碎備用。

4.2乙醇回流提取：將粉碎的靈芝用50%醫用酒精濕潤后，投入具夾層的反應罐中，再加入50%乙醇，以浸沒生藥為度。夾層加熱回流2h，密閉2h時，放出次回流液。同法用60%及70%乙醇回流提取2次。

4.3回收乙醇：將三次回流液合并，靜止48h，輕取上清液減壓回收乙醇。濃縮至每毫升含1g生藥量。

4.4醇沉：在上述濃縮液中緩緩加入95%乙醇，不斷攪拌，使含醇量達70%，室溫靜置24h以上，待沉淀完全后輕取上清液。減壓回收乙醇，濃縮至每毫升含2g生藥。

4.5水沉：在以上濃縮液中緩緩加入等量新鮮熱蒸餾水（70℃）和0.5%苯甲酸鈉，不斷攪拌，使之充分混合溶解，3～5℃下靜置48h以上，待沉淀完全，過濾至濾液澄明，即得每毫升含1g生藥量濃縮液，備用。減壓濃縮即成浸膏。

5.水提醇沉法

5.1原料處理：同上法。

5.2水提取：將粉碎之靈芝，加水濕潤約0.5h，置具夾層反應罐中，加水浸沒生藥為度，夾層通入蒸汽加熱至沸，水提2h，密閉2h，放出水提液。藥渣同法進行第二次水提。

5.3濃縮：將二次水提液合并，置反應罐中濃縮至每毫升含1g生藥。

5.4醇沉：在以上濃縮液中緩緩加入95%乙醇，不斷攪拌，使含醇量達70%，靜24h以上，待沉淀完全，輕取上清液，減壓回收乙醇，濃縮至每毫升含2g生藥。

5.5水沉：在以上濃縮液中緩緩加入等量70℃熱蒸餾水，并加入0.5%苯甲酸鈉，不斷攪拌，使其充分混合溶解，置3～5℃溫度下，靜置48h以上，待沉淀完全，過濾至澄明，即得每ml含1g靈芝的濃縮液。減壓濃縮后即得靈芝浸膏。

6.滲濾提取法

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6.1原料處理：同上法。

6.2裝缸及滲濾：在滲濾缸底放一層具孔隔板，上放4層紗布或尼龍布。將粉碎后的靈芝用40%醫用酒精濕潤0.5h后裝入缸內，裝藥量為缸體積的2/3，上壓重物。加入40%的乙醇量達生藥量的5倍時，改加50%乙醇，加量為生藥量9倍。滲濾時間約10d。

6.3回收濃縮：將滲濾液合并，采用減壓回收裝置回收酒精，濃縮至每毫升含1g生藥。

6.4醇沉：同醇提水沉法。

6.5水沉：同醇提水沉法。

深層發酵培養得到的靈芝菌絲體亦可用以上三種方法制備靈芝浸膏。

靈芝浸膏是靈芝中即溶于醇又溶于水的成分，是粗提取物，可進一步提取純化成精細產品。

四、靈芝提取物的生產設備：