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極敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒

Ultra-sensitive Enhanced Chemiluminescence Substrate Kit

試劑盒組成：

儲存：建議置于4 ?C避光保存，一年穩(wěn)定。

一、產(chǎn)品簡介：

極敏型 ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒是化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)，也稱為極敏型ECL發(fā)光液，用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸，靈敏度高，背景低，檢測靈敏度可達低飛克(femtogram)級乃至飛克級以下，適用于檢測極痕量蛋白或核酸。發(fā)光信號持續(xù)時間較長，半小時以后仍可維持75%的發(fā)光，便于反復(fù)曝光操作。與其他 ECL 化學(xué)發(fā)光底物相比，可顯著減少樣本及一抗和二抗的使用量。

二、原理：

極敏型ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP）的抗體、抗原或者核酸。蛋白質(zhì)或核酸在電泳后轉(zhuǎn)移到印跡膜上，以HRP標(biāo)記的抗體或探針結(jié)合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本產(chǎn)品配制的ECL工作液中，室溫孵育數(shù)分鐘，HRP使工作液中的魯米諾（Luminol）氧化并發(fā)光，試劑中添加的增強配方可以使這種發(fā)光得到極大增強，從而能夠檢測更低表達量的蛋白質(zhì)或核酸。此光經(jīng)X光膠片或者電子裝置感光記錄下來，可清晰顯示蛋白質(zhì)或核酸條帶。

三、產(chǎn)品優(yōu)點：

低飛克級靈敏度——極高的靈敏度，能快速檢測更廣泛的蛋白范圍，可檢測低飛克級乃至飛克以下的蛋白量。

信號穩(wěn)定——發(fā)光時間較長，能進行多次曝光，半小時以后仍可維持75%的發(fā)光。

信號強——發(fā)光信號比對碘苯酚增強的 HRP-魯米諾檢測體系得到極大增強。

穩(wěn)定性較高——試劑盒可在4度穩(wěn)定存放一年。

節(jié)約抗體——需要更少（稀釋更多）的一抗和二抗，特別節(jié)省抗體(推薦用量：一抗0.01-0.2 μg/mL，二抗2-10 ng/mL)。

四、使用方法：

1. 印跡膜制備：執(zhí)行常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記的抗體或者HRP標(biāo)記的核酸探針孵育、洗膜；ECL工作液含有HRP催化的發(fā)光底物，檢測系統(tǒng)必須基于HRP酶標(biāo)記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要，所有步驟均在室溫下完成。

2. ECL工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，充分混勻后盡快使用；將膜片置混合液中，于室溫下孵育約2分鐘，每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片，注意不要在膜片表面形成氣泡。

3.蛋白或核酸信號顯現(xiàn)：

1). 用平頭鑷鉗住膜片，垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑，僅留下少量液體覆蓋表面，不可讓膜完全干燥；

2). 將膜片置于保鮮膜上，吸附蛋白面朝上，小心趕盡氣泡；

3). 用電子裝置感光，或在暗室中用X光片曝光；

4). 根據(jù)信號強弱適當(dāng)調(diào)整曝光時間，也可選擇不同時間多次曝光，以取得更佳效果。

五、安全性：

無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。如果不慎與眼、皮膚和衣物接觸，請立刻用大量清水沖洗。

六、注意事項：

1．由于不同品牌的抗體質(zhì)量不同，以及抗體的保存條件和保存時間的不同，初次使用時建議對抗體用量進行優(yōu)化，以取得更優(yōu)效果。

2．勿將ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽光或強光下，否則易導(dǎo)致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長時間暴露在陽光下，實驗室光照對試劑盒影響不大；除了X光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。

3．使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤狀態(tài)；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號的產(chǎn)生。

4．使用前配制ECL工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取A液和B液時一定要用不同的槍頭，互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑。

5．印跡膜與ECL工作液孵育后約3 min時發(fā)出的熒光最強，隨后熒光會隨著時間的延長而緩慢減弱，至30 min仍可保持約75%的光信號；蛋白點熒光較弱時可以適當(dāng)延長曝光時間；使用過少的ECL工作液不利反應(yīng)進行，為達節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。

6．使用生物素/親和素體系時，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因為脫脂奶粉中含有多種內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號。

7. 避免將多張膜置于同一個洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。

8. 金屬氧化物顆粒可能會造成膜上出現(xiàn)顆粒狀斑點，避免使用帶有銹跡的剪刀以及鑷子，建議使用塑料的平頭鑷子。

9．疊氮化鈉（NaN3）能抑制HRP活性，應(yīng)避免使用NaN3，如必須使用，濃度不要超過0.01%。

10. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的干凈。

11.本產(chǎn)品僅供研究使用。